Aufgabe 1 - 2 · Abitur NRW Biologie LK · Haupttermin · Weiterbildungskolleg 2021
Thema: Humangenetik, Gendiagnostik und Gentechnik · Aus der Prüfung LK · Haupttermin · Weiterbildungskolleg (Kolleg) (2021)
Aufgabenstellung
Material A: Rotfeuerfische im Westatlantik
Rotfeuerfische stammen ursprünglich aus dem Indopazifik, der aus dem Indischen Ozean und dem zentralen Pazifik besteht. Die beiden Rotfeuerfisch-Arten Pterois miles und Pterois volitans wurden wahrscheinlich unabsichtlich durch den Menschen von dort in den Westatlantik eingeführt.
Rotfeuerfische leben in Korallenriffen. P. miles und P. volitans sehen nahezu identisch aus und sind durch ihre Form und Farbe den Korallen im Riff ähnlich. Dort lauern sie ihrer Beute wie kleinen Fischen und Krebstieren auf. Feinde haben sie im Atlantik nur wenige. Die Weibchen der Rotfeuerfische legen im Jahr bis zu zwei Millionen Eier. Die Rotfeuerfischjungen schlüpfen etwa 36 Stunden nach dem Ablaichen und leben frei schwebend in oberflächennahen Wasserschichten. Oftmals werden sie durch Strömungen weit von ihrem Laichort fortgetragen.
Die Populationsentwicklung der Rotfeuerfische wurde im Westatlantik zwischen 2004 und 2010 an mehreren ausgewählten Riffabschnitten im Rahmen von Tauchgängen untersucht (Abbildung 1). Aufgrund ihrer Ähnlichkeit konnte man nicht zwischen den beiden Rotfeuerfischarten unterscheiden.
Zusätzlich wurde die Veränderung der Biomasse von Fischarten, die entweder zum Beutespektrum der Rotfeuerfische oder zu den Nahrungskonkurrenten zählen, erfasst (Abbildung 2). Magenuntersuchungen der Rotfeuerfische ergaben, dass ihre Nahrung zu 90 % aus kleinen Rifffischen vieler verschiedener Arten besteht. Diese ernähren sich ihrerseits von Algen, die Produzenten im empfindlichen Ökosystem Korallenriff sind. Algen können Korallen überwuchern, wodurch diese dann absterben.
Material B: Genetischer Fingerabdruck der Rotfeuerfischarten
Lange Zeit war unklar, zu welchen Arten die gesichteten Rotfeuerfische im Westatlantik gehören, weil die morphologische Unterscheidung schwierig ist. Im Jahr 2017 wurde ein Verfahren entwickelt, mit dem man genetische Fingerabdrücke beider Arten erstellen kann. Dazu wird das 1160 bp lange mitochondriale cytb -Gen der Rotfeuerfische mittels PCR vervielfältigt. Ausschnitte aus der Sequenz des cytb -PCR-Produkts von P. volitans und P. miles sind in Tabelle 1 dargestellt. Das cytb -PCR-Produkt wird anschließend mit den Restriktionsenzymen EcoRV bzw. Cac8I behandelt. EcoRV hat die Erkennungssequenz 5'-GATATC-3' und Cac8I die Erkennungssequenz 5'-GCNNGC-3', wobei N für ein beliebiges Nukleotid steht. Nach der Behandlung mit den Restriktionsenzymen wurden die PCR-Produkte mittels Gelelektrophorese analysiert. Abbildung 3A zeigt die Bandenmuster nach Behandlung mit dem Restriktionsenzym EcoRV. Neben Vertretern von P. miles und P. volitans aus dem Westatlantik wurden auch Individuen von P. miles aus dem Indopazifik untersucht.
Material C: Ausbreitung der Rotfeuerfische
Es wird vermutet, dass die Ausbreitung von Pterois volitans und Pterois miles im Westatlantik auf eine einmalige Einführung von wenigen Tieren beider Arten durch den Menschen zurückzuführen ist. Zur Überprüfung dieser Hypothese wurde eine mitochondriale DNA-Sequenz mit einer Größe von 680 Basenpaaren von im Westatlantik gefangenen Rotfeuerfischen beider Arten mit denen von Rotfeuerfischen aus dem ursprünglichen Lebensraum der jeweiligen Art verglichen (Tabelle 2).
Tabelle 2 Vergleich von mitochondrialer DNA
· P. volitans · P. miles
Ursprünglicher Lebensraum · Westatlantik · Ursprünglicher Lebensraum · Westatlantik
Anzahl der untersuchten Individuen · 70 · 734 · 94 · 21
Anzahl der Varianten des untersuchten mitochondrialen DNA-Abschnitts · 36 · 9 · 38 · 1
Material D: Eindämmung der invasiven Rotfeuerfischarten
Bei P. volitans und P. miles wird das genotypische Geschlecht über Geschlechtschromosomen bestimmt: Weibchen haben den Genotyp XX und Männchen XY. Allerdings kann sich das phänotypische Geschlecht bei den beiden Rotfeuerfischarten nach dem Schlüpfen noch ändern. So können Männchen mit dem Genotyp XY durch künstliche Hormonanreicherung von Östrogenen in der Nahrung oder im umgebenden Wasser zu fortpflanzungsfähigen funktionalen Weibchen werden.
Zur Regulation der Feuerfischpopulationen im Westatlantik wurde ein Zuchtprogramm geplant, das in ähnlicher Form auch schon bei anderen Fischarten eingesetzt wurde. Dabei wurde ein Kreuzungsschema zur Züchtung von Männchen mit dem Genotyp YY entworfen (Abbildung 4) und deren Aussetzung ins Freiland als mögliche Methode zur Eindämmung der invasiven Rotfeuerfischarten diskutiert. Männchen mit dem Genotyp YY zeugen fruchtbare Nachkommen.
2. Erklären Sie, nach welchem Grundprinzip eine DNA-Gelelektrophorese funktioniert. Zeichnen Sie in die abgebildeten Sequenzausschnitte (Tabelle 1, Material B) die Erkennungssequenzen von EcoRV und Cac8I ein. Erklären Sie die Bandenmuster in Abbildung 3A und skizzieren Sie in die Vorlage (Abbildung 3B, Material B) die Bandenmuster, die bei den Cac8I-Restriktionsansätzen zu erwarten sind. Beurteilen Sie, inwiefern EcoRV und Cac8I bei den aufgeführten Rotfeuerfischen einen eindeutigen Nachweis erlauben (Material B). [26 Punkte]
a)
b)
Zeichnen Sie in Tabelle 1 die Schnittstellen bzw. Erkennungssequenzen ein und skizzieren Sie die Banden in der Gelvorlage (Abbildung 3B). Laden Sie anschließend ein Foto Ihrer Zeichnungen/Skizzen hoch:
c)
d)

Lösung
Nach den offiziellen Korrekturhinweisen
Erklären Sie, nach welchem Grundprinzip eine DNA-Gelelektrophorese funktioniert.
Lösung: Die DNA-Gelelektrophorese ermöglicht die Auftrennung verschieden großer DNA-Fragmente. Aufgrund negativer Ladungen (Phosphatgruppen) wandert die DNA in einem elektrischen Feld in Richtung des Pluspols (Anode). Das Trägermaterial (z. B. Agarose-Gel) wirkt wie ein engmaschiges Netz (Molekularsieb) und behindert größere Moleküle stärker, sodass sich kleine DNA-Fragmente im Gel schneller bzw. weiter bewegen als große.
Zeichnen Sie in die abgebildeten Sequenzausschnitte (Tabelle 1, Material B) die Erkennungssequenzen von EcoRV und Cac8I ein und skizzieren Sie in die Vorlage (Abbildung 3B, Material B) die Bandenmuster, die bei den Cac8I-Restriktionsansätzen zu erwarten sind.
Lösung:
Erklären Sie die Bandenmuster in Abbildung 3A.
Lösung: - Das etwa 1200 bp lange Fragment bei den Kontrollen von *P. volitans* und *P. miles* entspricht der erwarteten Größe des ungeschnittenen PCR-Produkts von 1160 bp. - Das PCR-Produkt von *P. volitans* zeigt auch nach Restriktion mit EcoRV nur eine einzelne Bande bei 1160 bp, da das PCR-Produkt keine EcoRV-Erkennungssequenz besitzt und ungeschnitten bleibt. - Die PCR-Produkte von *P. miles* (Westatlantik und Indopazifik) ergeben jeweils die gleichen zwei Banden bei ca. 450 bp und 700 bp (exakt: 425 bp und 735 bp), da beide an derselben Position eine EcoRV-Schnittstelle aufweisen.
Beurteilen Sie, inwiefern EcoRV und Cac8I bei den aufgeführten Rotfeuerfischen einen eindeutigen Nachweis erlauben (Material B).
Lösung: - Die Verwendung von EcoRV ermöglicht eine Unterscheidung zwischen *P. volitans* (eine Bande bei 1160 bp) und *P. miles* (zwei Banden bei 425 bp und 735 bp). Allerdings ist mit EcoRV keine Unterscheidung zwischen *P. miles (Indopazifik)* und *P. miles (Westatlantik)* möglich, da beide identische Schnittstellen aufweisen. - Die Verwendung von Cac8I ermöglicht sowohl eine eindeutige Unterscheidung zwischen *P. volitans* (zwei Fragmente: 260 bp und 900 bp) und *P. miles* als auch eine Differenzierung zwischen den beiden Herkünften von *P. miles*: Individuen aus dem Indopazifik weisen vier Fragmente auf (77, 164, 341, 578 bp), während solche aus dem Westatlantik nur zwei sehr ähnliche Fragmente besitzen (578 und 582 bp). - Fazit: Für einen vollkommen eindeutigen Nachweis und die Unterscheidung aller hier aufgeführten Rotfeuerfischgruppen genügt das Restriktionsenzym Cac8I allein.
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