Pregunta 41 · Bioquímica URV 2017

Explica detalladament en quin principi bioquímic i tècnic es fonamenta l'assaig de quantificació de l'activitat de la lactat deshidrogenasa (LDH) realitzat a les sessions de laboratori.

Solución: La quantificació de la lactat deshidrogenasa (LDH) es basa en el seguiment cinètic espectrofotomètric de la reacció d'òxid-reducció reversible que catalitza: $$\text{Piruvat} + \text{NADH} + \text{H}^+ \stackrel{\text{LDH}}{\rightleftharpoons} \text{Lactat} + \text{NAD}^+$$ Els elements fonamentals de la determinació són: - Diferència d'absorbància: El coenzim reduït NADH presenta un pic d'absorbància característic a la longitud d'ona de $\lambda = 340\text{ nm}$, mentre que la seva forma oxidada ($\text{NAD}^+$) no absorbeix a aquesta longitud d'ona. - Mesura cinètica: En condicions de saturació de substrats (piruvat i NADH), la disminució d'absorbància a 340 nm per unitat de temps ($\Delta A_{340}/\text{min}$) és directament proporcional a la velocitat de consum de NADH i, per tant, a l'activitat catalítica de la LDH present a la mostra. - Càlcul d'activitat: Emprant la llei de Beer-Lambert i el coeficient d'extinció molar del NADH a 340 nm ($\varepsilon = 6220\text{ M}^{-1}\text{cm}^{-1}$), es transforma el pendent d'absorbància en unitats d'activitat enzimàtica (U/L o $\mu\text{mol}/\text{min}$).