Examen pràctic de laboratori: Bioquímica instrumental i metabolisme

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

a.

Espectrofotometria i densitat òptica (absorbància).

b.

Patró, recta patró i la funció que tenen en quantificació.

g.

Diferència entre el concepte de tub blanc i la funció d' auto-zero d'un espectrofotòmetre.

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

c.

Dissolució tampó o amortidora.

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

d.

Fonament del reactiu de Biuret.

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

e.

Test de tolerància a la glucosa i funcionament bàsic d'un glucosímetre biamperomètric.

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

f.

Paràmetres cinètics d'un enzim: $V_{\max}$ i $K_m$.

1. Definicions. Conceptes fonamentals de laboratori

Definiu de manera concisa i amb precisió bioquímica els conceptes següents emprats habitualment al laboratori:

Exercici 1. Recta patró i mètode del Biuret

Es vol quantificar la concentració de proteïnes totals en una mostra de sèrum humà mitjançant el mètode del Biuret ($\lambda = 545\text{ nm}$). Per fer-ho, es prepara una recta patró utilitzant una solució mare d'albúmina sèrica bovina (BSA) de $50\text{ mg/mL}$. Es pipetegen 6 tubs amb els volums de BSA i d'aigua indicats a la taula següent (volum previ de $0{,}1\text{ mL}$), i a continuació s'afegeixen $0{,}9\text{ mL}$ de reactiu de Biuret a cadascun (volum final de $1{,}0\text{ mL}$):

Tub · Volum BSA ($\mu\text{L}$) · Volum $\text{H}_2\text{O}$ ($\mu\text{L}$) · Concentració final (mg/mL) · Absorbància (545 nm)

0 · 0 · 100 · 0 · 0

1 · 20 · 80 · 1 · 0,25

2 · 40 · 60 · 2 · 0,50

3 · 60 · 40 · 3 · 0,75

4 · 80 · 20 · 4 · 1,00

5 · 100 · 0 · 5 · 1,25

a)

Definiu què és una recta patró, quina utilitat pràctica té i quins passos generals es segueixen per preparar-la.

b)

Comproveu el càlcul de la concentració final per al tub 1 i deduïu l'equació de la recta de calibratge ($A = f(c)$).

c)

Dibuixeu i comenteu la gràfica d'absorbància enfront de la concentració de proteïna.

Exercici 2. Preparació d'una dilució seriada

Es requereix preparar una dilució 1:1000 d'una mostra de vi per tal de disposar de volum suficient per analitzar almenys dues rèpliques de 100 μL cadascuna. Al laboratori es compta únicament amb el material següent:

0,5 mL de vi (mostra pura).

100 mL d'aigua destil·lada com a diluent.

Micropipetes de rangs 10–200 μL i 200–1000 μL, amb les seves respectives puntes.

Descriviu el procediment experimental pas a pas mitjançant una dilució seriada i esquematitzeu els volums utilitzats a cada tub, verificant que es compleixen les restriccions de volum i de material.

Exercici 3. Fonament i tipus de tub blanc

En les anàlisis espectrofotomètriques és imprescindible la utilització de tubs de referència o blancs.

a)

Expliqueu quina és la finalitat d'un tub blanc en una reacció colorimètrica i per què és necessari.

b)

Indiqueu quins components conté un tub blanc típic.

c)

Descriviu els dos tipus de blancs utilitzats al laboratori (blanc de reactiu i blanc de mostra), especificant quina interferència corregeix cadascun i quina és la seva composició.

Exercici 4. Estudi de la cinètica de la glucèmia

Dibuixeu i expliqueu raonadament l'evolució dels nivells de glucosa en sang (glucèmia en funció del temps) en tres situacions fisiològiques diferents:

a)

En condicions de dejuni mantingut.

b)

Després de la ingesta d'una ració de pa (aliment ric en midó).

c)

Després de la ingesta d'una quantitat equivalent de glucosa lliure en solució.