Ejercicio 7 - Tècniques bioquímiques i anàlisi quantitativa… · Bioquímica UB 2017

7. Preguntes 61-70. Tècniques bioquímiques i anàlisi quantitativa de laboratori

Resol i justifica cadascun dels següents enunciats experimentals indicant si són vertaders (V) o falsos (F) i aportant la justificació o càlcul corresponent:

a.

En una cromatografia de filtració en gel amb un rang de fraccionament d'1.000 a 5.000 Da, una proteïna de massa molecular 66.000 Da eluirà en la mateixa fracció que el blau dextrà ($2\cdot 10^6\text{ Da}$).

b.

Una matriu de filtració sobre gel que posseeixi un rang de fraccionament útil d'1.000 a 5.000 Da permet separar satisfactòriament tres molècules de masses 200 Da, 4.000 Da i 50.000 Da.

c.

En el mètode espectrofotomètric de quantificació de proteïnes per Biuret, el tub blanc incorpora la solució de proteïna patró però omet el reactiu de Biuret.

d.

A partir de la corba de calibratge per al mètode de Biuret mostrada a continuació, un volum de 5 ml d'una mostra de proteïna que proporciona una absorbància de 0,3 unitats de D.O. equival a una quantitat total de 20 mg de proteïna.

e.

Es mesclen en proporció 1:1 una solució de proteïna de concentració 3 mg/ml amb tampó de càrrega per a electroforesi. Si es carreguen 20 µl d'aquesta mescla en un pou del gel, s'estan dipositant exactament 16,5 µg de proteïna.

f.

A la tècnica de SDS-PAGE, el dodecilsulfat sòdic (SDS) actua com a agent desnaturalitzant aniònic que transfereix càrrega negativa uniforme a les proteïnes per permetre'n la migració cap a l'ànode (pol positiu).

g.

Durant la polimerització d'un gel de poliacrilamida discontinu, la primera fase que cal abocar i polimeritzar és el gel concentrador (stacking gel).

h.

Si es barregen 0,2 ml d'una solució de midó a l'1% (p/v) amb 1,8 ml de tampó fosfat, la concentració resultant de midó en el tub és d'$1\cdot 10^{-3}\text{ g/ml}$.

i.

En l'assaig cinètic de l'alfa-amilasa, el polisacàrid substrat (midó) reacciona手 reduint directament el reactiu àcid 3,5-dinitrosalicílic (DNS) per donar lloc al producte acolorit.

j.

A partir del gràfic de dobles recíprocs (Lineweaver-Burk) mostrat a sota, sabent que 0,5 unitats de densitat òptica (D.O.) equivalen a 4 mg de producte format, que la massa molecular del producte és de 4.000 g/mol i que el temps d'incubació va ser d'1 minut, es dedueix que la $V_{\max}$ és de 4 UI (4 µmol de producte/min).