Problema 14 · Estructura i Funció de Biomolècules UAB Exemples

14. Tercer parcial. Exercici-problema 1. Purificació de la creatina quinasa

En un laboratori es vol purificar l'enzim creatina quinasa a partir de teixit muscular esquelètic de rata mitjançant el següent procediment:

S'obtenen 10 g de proteïna total en un volum inicial d'extracte cru de 40 ml, el qual presenta una activitat enzimàtica de 300 U/ml. A continuació, l'extracte s'introdueix en una columna de bescanvi catiònic, recollint-se una fracció de 10 ml amb una activitat de 200 U/ml i un total de 500 mg de proteïna. Finalment, aquesta mostra se sotmet a una cromatografia d'afinitat, recuperant una fracció de 5 ml amb una activitat creatina quinasa de 70 U/ml i un contingut total de 10 mg de proteïna.

a.

Completeu la taula de purificació calculant l'activitat total, l'activitat específica, el rendiment percentual i el factor de purificació obtinguts a cada pas:

Etapa · Volum (ml) · Prot. total (mg) · Activitat (U/ml) · Activitat total (U) · Act. específica (U/mg) · Rendiment (%) · Factor purificació

Extracte cru · 40 · 10.000 · 300

Bescanvi catiònic · 10 · 500 · 200

Cromatografia d'afinitat · 5 · 10 · 70

b.

Quina de les dues etapes cromatogràfiques resulta més eficient en termes de purificació?

c.

Considereu acceptable el rendiment assolit al final del procés? Raoneu la resposta.

d.

Descriviu quin assaig analític permetria comprovar amb certesa si la fracció final obtinguda conté exclusivament l'enzim pur.